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本制品是基于RCA技术、针对环状DNA为模板专门开发的滚环扩增试剂盒，扩增得到的DNA可以直接用于测序、酶切或PCR等后续实验。

RCA（Rolling Circle Amplification，滚环扩增）是利用phi29 DNA聚合酶的超长合成能力，在一定条件下（如随机引物、dNTP、Mg离子存在时）能够以线状的超长基因组DNA或环化后的短DNA为模板进行全基因组扩增的技术。

• 即开即用，十分简单方便，用户不需要辛苦摸索条件。
  
• 直接使用纯化的环状单链DNA或环状双链DNA为模板。如果样本为线状DNA，需要预先对其进行环化（本公司有单链DNA环化和双链DNA环化试剂盒）。
  
• RCA属于恒温扩增，操作简单，但如果要实时监测，需要荧光定量PCR仪器。
  如果没有，也可以电泳检测或PCR检测扩增效果。
  
• 含荧光染料，可以实时监测RCA反应过程，不需要跑电泳检测，节约宝贵样品（因为进行RCA扩增的样品都非常珍贵）。
  
• 实时检测使得反应可以在平台期后就可以结束，避免phi29 DNA聚合酶具有的强3'→5'外切酶活性降解已经合成的DNA。
  
• phi29 DNA聚合酶具有的强3'→5'外切酶活性，故扩增具有高保真性。
  
• 可以将模板DNA在几个小时到十几小时内扩增万倍左右。

• 配制反应体系
  
  • 按下表加入各成分：
    

    成分	管1 （样本）	管2 （无模板对照）
    环状DNA(100pg)	1μL	-
    超纯水	4μL	5μL
    RCA专用随机引物溶液	2μL	2μL
    4×染料法实时RCA Mix	2.5μL	2.5μL

  • 在PCR仪器上95℃ 1分钟，30分钟内温度缓慢降到25℃缓慢降低有利于引物与模板复性。
    
  • 向各反应管中加入0.5μL phi29 DNA聚合酶(10U/μL)，配制成10μL的反应体系。
• 放荧光定量PCR仪器上，设置30℃保温16小时，每10分钟设置成一个循环，采集一次SYBR通道的荧光信号。由于是可以实时检测反应，所以反应不一定要在设置时间到达后结束，可以在扩增曲线进入平台期后（已经没有新的DNA合成）结束。因为phi29 DNA聚合酶有很强的3'→5'外切酶活性，在聚合反应停止后，它可能会进入酶切模式，逐渐降解已经合成的DNA。
  
• 65℃保温10分钟灭活酶。由于phi29 DNA聚合酶有很强的3'→5'外切酶活性，因此必须灭活，否则它将逐渐降解已经合成的DNA。
  
• 典型实验结果。有扩增的样本将有平缓的S荧光曲线，无模板对照将没有此标准扩增曲线。
  
• 如果没有荧光定量PCR仪器，则只能电泳检测或PCR检测是否有扩增。
  
• 扩增所得DNA可以用于后续实验。